Ген клонируют в плазмиде, которая содержит ген устойчивости к ампициллину и фрагмент гена lacZ', а сайт клонирования расположен внутри lacZ'. Ген встраивают в этот сайт. Полученной лигазной смесью трансформируют клетки E. coli без собственных плазмид, у которых есть вторая часть β-галактозидазы, поэтому при наличии целого lacZ' фермент работает. Клетки высевают на агар с ампициллином, ИПТГ и X-gal (β-галактозидаза расщепляет X-gal с образованием синего пигмента). Какой результат ожидается для трёх типов клеток: без плазмиды, с плазмидой без вставки и с рекомбинантной плазмидой?
Показать ответ и разборСкрыть ответ и разбор
Верный ответ
- AБез плазмиды — не растут; плазмида без вставки — синие колонии; рекомбинантная плазмида — белые колонии
Разбор
1) Клетки без плазмиды не имеют гена устойчивости к ампициллину, поэтому на среде с антибиотиком не растут. 2) Клетки с плазмидой без вставки устойчивы к ампициллину, lacZ' у них целый, ИПТГ индуцирует его работу, β-галактозидаза расщепляет X-gal, и колонии синие. 3) У рекомбинантной плазмиды ген устойчивости сохранён, поэтому клетки растут, но вставка разрывает lacZ', и функциональная β-галактозидаза не образуется. X-gal не расщепляется, колонии белые. Значит, верный результат: «Без плазмиды — не растут; плазмида без вставки — синие колонии; рекомбинантная плазмида — белые колонии».